【京楼】[02.04]『君临天下』→Unique King← 细胞培养知识12

High Five无血清培养基中去污剂的浓度：0.025 g/L Tween-80，1.0 g/L 

Pluronic Poly-all。 
21.High Five细胞用多大的密度冻存？


======Jeong Yoonho,Happy Birthday=====　
我的愿望很简单，只希望你健康
我的愿望很单纯，只希望你快乐
我的愿望很诚恳，只希望你幸福 
2007.2.6是我陪你过的第一个生日，
不能为你做什么，是我最大的遗憾。
我会一直守在浩吧为你冲顶，
只能为你做这些，是我最大的幸福。
*V^___________________________^V*　 
==============叶の子============　

3.0x10E6 cells/ml 
22.在我的果蝇培养基中发现形成白色沉淀，加热后溶解。它是什么？对我的

细胞有害吗？


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可能是谷氨酰胺沉淀，但是更可能是L-酪氨酸沉淀。培养基中谷氨酰胺的浓

度比典型的2mM高6倍。


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酪氨酸的浓度比在RPMI 1640中高25倍，而且比谷氨酰

胺更加难以溶解。沉淀也可能是不止一种成分的复合物。它可能是由于贮存

在局部温度较低的地方引起。只要沉淀在培养条件下可以溶解，对实验不会

有不利的影响。


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23.如何从T25瓶中转移sf9细胞？能用胰蛋白酶消化吗？ 
我们强力推荐使用脱落细胞的方法，因为这项技术破坏性最小，生活力最高

。通过使用巴氏德吸液管


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，让细胞上培养基流动。作为一种选择你也可以轻

轻拍打培养瓶。只有在绝对必要的情况下，才使用胰酶消化细胞。胰酶消化

一个T25瓶的sf9细胞：1)去除培养基。2) 用2ml 1xPBS（足以覆盖细胞表面

）洗涤细胞，去除PBS.3) 加入2ml 1x胰酶EDTA（恰好覆盖细胞表面）。4) 

37 ℃孵育5到10分钟。在仪器下检测看到5分钟后它们正在向上移动。5) 向

细胞中加入2ml 细胞培养液，移入锥形管，


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用2ml培养液洗瓶壁，移入同一锥

形管中。（培养基中的FBS终止了胰酶的活性。）6) 离心（1100rpm）沉淀细

胞。去除培养基。7) 用新的培养基重新悬浮细胞。传代。 24.在Sf9, Sf21, 

和high Five细胞悬浮培养时，肝素的使用量是多少？


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为了防止悬浮培养细

胞聚集的形成，使用肝素浓度为10单位/毫升细胞悬液。 25.如何评估ES细胞

合格的胎牛血清？ 使用D3 ES细胞。这是一个对于胎牛血清中生长促进、生

长抑制和分化因子非常敏感的细胞系。相关生长效率分析：当ES细胞以非常

低的密度传入包含10％胎牛血清的生长培养基中，检测开始和支持ES细胞克

隆的能力。细胞毒分析：


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丰满，颜色较浅。

所有的分析在没有ESGRO的情况下进行的，培养基中出现ESGRO会掩盖由胎牛

血清所导致的问题。（ESGRO或LIF经常用来保持ES细胞处于未分化状态。）

经过培养发现，大约8批中有1批可以用来培养ES细胞。


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26.在重新冻存sf9细胞前，它可以传多少代？随着传代的次数的增加，它的

感染能力会降低吗？
通常情况当细胞经过30次传代后，应该返回冻存。无论什么时候记数时，都

应该检查细胞活力。如果超过95％的细胞保持有活力和在大约30小时左右加

倍，细胞仍然可以使用。如果活力和加倍时间下降，它们的感染力将不在是

有效的。


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