【京楼】[02.04]『君临天下』→Unique King← 细胞培养知识12

High Five无血清培养基中去污剂的浓度：0.025 g/L Tween-80，1.0 g/L 

Pluronic Poly-all。 
21.High Five细胞用多大的密度冻存？


======Jeong Yoonho,Happy Birthday=====　
我的愿望很简单，只希望你健康
我的愿望很单纯，只希望你快乐
我的愿望很诚恳，只希望你幸福 
2007.2.6是我陪你过的第一个生日，
不能为你做什么，是我最大的遗憾。
我会一直守在浩吧为你冲顶，
只能为你做这些，是我最大的幸福。
*V^___________________________^V*　 
==============叶の子============　

3.0x10E6 cells/ml 
22.在我的果蝇培养基中发现形成白色沉淀，加热后溶解。它是什么？对我的

细胞有害吗？


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可能是谷氨酰胺沉淀，但是更可能是L-酪氨酸沉淀。培养基中谷氨酰胺的浓

度比典型的2mM高6倍。


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酪氨酸的浓度比在RPMI 1640中高25倍，而且比谷氨酰

胺更加难以溶解。沉淀也可能是不止一种成分的复合物。它可能是由于贮存

在局部温度较低的地方引起。只要沉淀在培养条件下可以溶解，对实验不会

有不利的影响。


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23.如何从T25瓶中转移sf9细胞？能用胰蛋白酶消化吗？ 
我们强力推荐使用脱落细胞的方法，因为这项技术破坏性最小，生活力最高

。通过使用巴氏德吸液管


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，让细胞上培养基流动。作为一种选择你也可以轻

轻拍打培养瓶。只有在绝对必要的情况下，才使用胰酶消化细胞。胰酶消化

一个T25瓶的sf9细胞：1)去除培养基。2) 用2ml 1xPBS（足以覆盖细胞表面

）洗涤细胞，去除PBS.3) 加入2ml 1x胰酶EDTA（恰好覆盖细胞表面）。4) 

37 ℃孵育5到10分钟。在仪器下检测看到5分钟后它们正在向上移动。5) 向

细胞中加入2ml 细胞培养液，移入锥形管，


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深刻飛機；立刻大家；哀憐擴大解放；啦可見度法；啦可見度法；垃圾地方了；搭街坊的；浪費解放啦可見度法；啦


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　　　　﹏·`~thanks for everything & thanks U here~`·﹏　 
　 
　
　一個夢想..一種執著..一份癡狂..一個舞台..一段青春..一次勝利..　

　　　　　　　　　　　　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　。永遠の王- -°生日快樂　
　　 

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用2ml培养液洗瓶壁，移入同一锥

形管中。（培养基中的FBS终止了胰酶的活性。）6) 离心（1100rpm）沉淀细

胞。去除培养基。7) 用新的培养基重新悬浮细胞。传代。 24.在Sf9, Sf21, 

和high Five细胞悬浮培养时，肝素的使用量是多少？


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为了防止悬浮培养细

胞聚集的形成，使用肝素浓度为10单位/毫升细胞悬液。 25.如何评估ES细胞

合格的胎牛血清？ 使用D3 ES细胞。这是一个对于胎牛血清中生长促进、生

长抑制和分化因子非常敏感的细胞系。相关生长效率分析：当ES细胞以非常

低的密度传入包含10％胎牛血清的生长培养基中，检测开始和支持ES细胞克

隆的能力。细胞毒分析：


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当以非常低的密度传入包含30％胎牛血清的生长培

养基中，检测ES细胞和feeder细胞的生长能力。相关形态学和分化分析：检

测胎牛血清支持未分化ES细胞克隆的能力。通过碱性磷酸酶活性评估分化程

度。未分化的ES细胞小颜色深红粉红，分化的细胞较大，


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丰满，颜色较浅。

所有的分析在没有ESGRO的情况下进行的，培养基中出现ESGRO会掩盖由胎牛

血清所导致的问题。（ESGRO或LIF经常用来保持ES细胞处于未分化状态。）

经过培养发现，大约8批中有1批可以用来培养ES细胞。


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26.在重新冻存sf9细胞前，它可以传多少代？随着传代的次数的增加，它的

感染能力会降低吗？
通常情况当细胞经过30次传代后，应该返回冻存。无论什么时候记数时，都

应该检查细胞活力。如果超过95％的细胞保持有活力和在大约30小时左右加

倍，细胞仍然可以使用。如果活力和加倍时间下降，它们的感染力将不在是

有效的。


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其实啊喜欢你们已经一年半了`` 
可是真的没有为你做什么事`` 
看到你受伤``看到你难受``我什么忙也不帮不了你`` 
你知道吗？ 
喜欢你们真的好累`` 
可是也舍不得放手``` 
我是傻瓜~ 
一个只会静静的看着自己爱的人， 
却无能为力的傻瓜~ 
因为自己或许真的很爱很爱~ 
我们会为了一个从来没有正眼看过我们的人掉眼泪~ 
其实我们都是傻瓜`` 
天下最傻的大傻瓜`` 
其实我真的不想再当一个傻瓜了`` 
真的累了`` 
喜欢了一年半`` 
真不知道这一年半我是怎么挺过来的`` 
也许你会认为说的有点夸张``可是这都是真的`` 
我们可以为了一个连我们是谁都不知道的人放弃自己的幸福 
我们是一个傻瓜，一个连语言不通却傻傻的盯着屏幕痴痴的笑好久的人 
真的真的很爱你们`` 
爱到愿意为你们放弃自己``` 
爱到愿意一自己的幸福换你们的幸福和健康`` 
可是你们也许永远都不知道会有我们这样的傻瓜存在`` 
我们的幸福很简单~ 
只要你们笑一笑~ 
只要你们不再那么悲伤~ 
说真的我不知道我看到你们会怎么样 
也许会傻傻的站在原地爸,也许会哭吧,也许会跑掉吧(我也不知道为什么我就是觉得自己看到你们,我会跑掉,郁闷啊)太多的也许,但我可以保证的是我绝对不会去找你们要签名,也不会追着你们跑,也不会伸手去摸他们 
因为我怕我自己弄疼你们,怕伤到你们 
原来喜欢其他明星,总有想要得到的感觉 
可是对于你，不是 
我也不知道自己怎么了 
怎么那么傻 
但我知道 
只要你们幸福,我可以什么都不要 
只有傻瓜才会才会去享受一个人的恋爱`` 
只有傻瓜才会为了一个永远都不知道你存在的人哭的天昏地暗`` 
只有傻瓜才会看到他们受伤时希望受伤的是自己`` 
只有傻瓜才会情愿别人骂自己,也不愿听到别人说他们半点坏话` 
只有傻瓜才会天天趴在电脑前傻傻的笑,哇哇的哭`` 
只有傻瓜才会一边写着文,一边流眼泪`` 
为什么我会选择去当一个傻瓜? 
我不知道`` 
为什么别人骂我傻我会开心? 
我不知道`` 

我只知道 
傻瓜---这辈子当定了`` 
所以请你伤心难过的时候能想想我们这样的一群傻瓜 
 By:囡＆哟