大鼠视神经损伤模型实验操作流程
一、实验前准备动物与分组动物品系：成年SD大鼠（雄性，体重250-300 g）。分组设计：假手术组（仅暴露视神经，不钳夹），损伤组（视神经钳夹），治疗组（损伤+药物/细胞干预）。术前准备：暗适应12小时（减少光毒性）术前禁食4小时（不禁水）。二、手术操作流程麻醉与消毒麻醉：腹腔注射戊巴比妥钠（40 mg/kg）或吸入异氟烷，确认麻醉深度（无爪缩反射）。固定：俯卧位固定于恒温手术台（37℃），头部用胶带固定。消毒：术眼周围剃毛，碘伏+酒精交替消毒3次。2. 视神经暴露切口：沿眶上缘剪开皮肤约1 cm，钝性分离皮下组织及眼外肌。定位视神经：用棉签轻压眼球，暴露视神经（白色条索状，直径约0.5 mm）。关键点：避免损伤视网膜中央动脉（位于视神经腹侧）。3. 视神经钳夹钳夹位置：距眼球后极2 mm处（避开血管）。钳夹参数：压力：50 g/mm²（预实验校准）。时间：10-15秒（导致约60% RGCs凋亡）。验证损伤：观察瞳孔散大（直接对光反射消失）。4. 缝合与复苏分层缝合：6-0缝线缝合肌肉，4-0缝线缝合皮肤。眼部护理：涂抗生素眼膏，防止角膜干燥。术后复苏：单笼饲养，保暖至清醒。三、术后管理日常护理镇痛：术后3天布洛芬（5 mg/kg）加入饮水。抗感染：连续3天皮下注射青霉素（5万单位/kg）。眼部检查：每日观察有无感染、角膜混浊。关键注意事项避免血管损伤：钳夹时避开视网膜中央动脉（术野出血立即电凝止血）。标准化钳夹压力：使用压力校准钳，同一实验者操作。假手术对照：暴露视神经后不钳夹，排除手术创伤影响。四、常见问题与解决问题原因解决方案术后角膜溃疡干燥或感染加强眼膏涂抹，无菌操作RGCs标记失败荧光金注射位点偏差校准立体定位仪，预实验验证轴突再生无差异钳夹压力不足增加钳夹时间（至20秒）或压力
一、实验前准备动物与分组动物品系：成年SD大鼠（雄性，体重250-300 g）。分组设计：假手术组（仅暴露视神经，不钳夹），损伤组（视神经钳夹），治疗组（损伤+药物/细胞干预）。术前准备：暗适应12小时（减少光毒性）术前禁食4小时（不禁水）。二、手术操作流程麻醉与消毒麻醉：腹腔注射戊巴比妥钠（40 mg/kg）或吸入异氟烷，确认麻醉深度（无爪缩反射）。固定：俯卧位固定于恒温手术台（37℃），头部用胶带固定。消毒：术眼周围剃毛，碘伏+酒精交替消毒3次。2. 视神经暴露切口：沿眶上缘剪开皮肤约1 cm，钝性分离皮下组织及眼外肌。定位视神经：用棉签轻压眼球，暴露视神经（白色条索状，直径约0.5 mm）。关键点：避免损伤视网膜中央动脉（位于视神经腹侧）。3. 视神经钳夹钳夹位置：距眼球后极2 mm处（避开血管）。钳夹参数：压力：50 g/mm²（预实验校准）。时间：10-15秒（导致约60% RGCs凋亡）。验证损伤：观察瞳孔散大（直接对光反射消失）。4. 缝合与复苏分层缝合：6-0缝线缝合肌肉，4-0缝线缝合皮肤。眼部护理：涂抗生素眼膏，防止角膜干燥。术后复苏：单笼饲养，保暖至清醒。三、术后管理日常护理镇痛：术后3天布洛芬（5 mg/kg）加入饮水。抗感染：连续3天皮下注射青霉素（5万单位/kg）。眼部检查：每日观察有无感染、角膜混浊。关键注意事项避免血管损伤：钳夹时避开视网膜中央动脉（术野出血立即电凝止血）。标准化钳夹压力：使用压力校准钳，同一实验者操作。假手术对照：暴露视神经后不钳夹，排除手术创伤影响。四、常见问题与解决问题原因解决方案术后角膜溃疡干燥或感染加强眼膏涂抹，无菌操作RGCs标记失败荧光金注射位点偏差校准立体定位仪，预实验验证轴突再生无差异钳夹压力不足增加钳夹时间（至20秒）或压力
