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IP属地:山东1楼2025-06-10 00:04回复
    Normalization to the inactive form of nGFP–splitOGA revealed that fl-OGA expression globally decreased the levels of O-GlcNAcylated proteins, while nGFP–splitOGA expression considerably reduced the levels of O-GlcNAcylated GFP–Nup62 with negligible perturbation of the O-GlcNAc proteome by comparison.
    大概就是全长OGA对整个proteome的O-GlcNAcylated水平有影响,但是nGFP–splitOGA对proteome整体影响不大,但特异的影响GFP-Nup62.
    两个红点应该是左边那两堆点里面的其中一个,一堆点是proteome测到的所有蛋白,其中有GFP-Nup62。每一个点都是对inactive OGA control的比值,0就是fl-OGA或者nGFP–splitOGA不影响O-GlcNAcylated,0以下就是降低。


    IP属地:美国2楼2025-06-10 22:07
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      2025-07-31 09:06:05
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      解释一下Target protein deglycosylation in living cells by a nanobody-fused split O-GlcNAcase的Fig。3d解释一下Target protein deglycosylation in living cells by a nanobody-fused split O-GlcNAcase的Fig。.纳米抗体融合分裂型O-GlcNAcase活细胞靶蛋白去糖基化技术中Figure 3d的解析
      本研究开发了一种基于纳米抗体融合分裂型O-GlcNAcase (OGA)的创新工具,用于在活细胞中选择性地去除特定靶蛋白上的O-GlcNAc修饰。虽然提供的搜索结果中没有包含Figure 3d的具体内容描述,但基于该研究的整体实验设计和方法学背景,可以推断这一图表在展示系统选择性和有效性方面的关键数据。
      研究背景与技术原理
      O-连接的N-乙酰葡糖胺(O-GlcNAc)是一种重要且动态的翻译后修饰,存在于数千种核质蛋白上134。传统的研究方法要么影响细胞内所有的O-GlcNAc糖类,要么只能作用于单个蛋白质上的单个氨基酸上的单个糖类,无法提供关于O-GlcNAc分子对整个蛋白质功能影响的深入见解2。
      研究团队开发的纳米抗体融合分裂型OGA系统通过系统性的细胞优化,成功识别出一种具有降低固有去糖基化活性的分裂型OGA,当由纳米抗体引导时,能够选择性地从目标蛋白质中去除O-GlcNAc134。这一创新工具为在细胞内直接从单个蛋白质中选择性去除O-GlcNAc提供了新的策略。
      分裂型OGA系统的优化设计
      研究发现人类OGA在天冬氨酸413位点含有半胱天冬酶-3切割位点,在细胞凋亡过程中会将OGA分裂为N端和C端片段,这两个片段在活细胞中同时表达时可以重组酶活性4。基于这一发现,研究团队通过迭代减少每个片段的大小,生成了三个N端片段(N1-N3)和四个C端片段(C1-C4),最终确定N2-C3组合为最优的分裂型OGA系统。
      通过将纳米抗体融合到N端或C端片段上,该系统能够选择性地恢复对目标蛋白质的去糖基化活性。实验证明,只有N2和融合了纳米抗体的C3片段对能够在GFP-Nup62上显示选择性的去糖基化活性4。
      系统选择性与蛋白质组学验证
      研究通过蛋白质组学分析直接比较了nGFP-splitOGA与全长OGA(fl-OGA)的作用效果,结果显示GFP-Nup62是唯一一个被nGFP-splitOGA去糖基化程度超过fl-OGA的蛋白质,这证明了该系统的高度选择性4。这种选择性对于避免脱靶效应和准确研究特定蛋白质上O-GlcNAc修饰的功能至关重要。
      技术应用的广泛性
      该技术的模块化设计使其能够适用于多种纳米抗体,研究团队使用四种不同的纳米抗体对五种目标蛋白质进行了验证,包括识别GFP、Ubc标签、BC2标签等的纳米抗体14。这种广泛的适用性为研究不同蛋白质上O-GlcNAc修饰的功能提供了强大的工具平台。
      对"不可成药"蛋白质研究的意义
      由于O-GlcNAc修饰常见于被认为是"不可成药"的蛋白质上,这项工作对于开发新的疾病治疗方法具有重要意义2。约85%的蛋白质,包括与阿尔茨海默病和帕金森病相关的蛋白质,都可能受益于这种精确的糖基化修饰研究方法。
      结论
      虽然具体的Figure 3d内容在提供的搜索结果中未详细描述,但基于该研究的整体框架,该图表很可能展示了纳米抗体融合分裂型OGA系统在选择性去糖基化方面的关键验证数据。这一创新技术为O-GlcNAc功能评估和工程化提供了新的策略,有望推动对这一重要翻译后修饰在慢性疾病如癌症、糖尿病和阿尔茨海默病中作用机制的深入理解。


      IP属地:美国3楼2025-06-10 22:15
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        看不懂,我觉得像两只小鸟的俯视图


        IP属地:湖南来自Android客户端4楼2025-06-11 01:11
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