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CCK8——细胞增殖曲线

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CCK8细胞增殖曲线绘制
CCK8‼️是细胞增殖表型hin重要的一个实验[lbk]赞R[rbk]
原理:WST-8(四唑盐)是 CCK-8 的主要成分,呈粉色[lbk]红色心形R[rbk]。在电子载体(1-Methoxy PMS)的作用下被线粒体中的脱氢酶还原为黄色[lbk]黄色心形R[rbk]甲臜类染料(Formazan),并释放到细胞外溶解在培养基中,生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测仪在 450nm 波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量
注意事项⚠️:
1⃣️细胞要充分消化,而且一定要铺匀,还不能过密,一般3000个细胞/孔,不同细胞还需要调整
2⃣️关于CCK8孵育1-4h,具体时间可以做预实验摸索,得到CCK8最佳反应时间
3⃣️CCK8最好配成10%稀释液(用完全培养基稀释)加到细胞中
4⃣️最好用双波长检测,检测波长450nm,参比波长600nm,参比波长可以过滤掉因为液体浑浊,孔板底部不干净带来的测量误差(OD450-OD600即可,但是我比较懒,没测参比波长[lbk]偷笑R[rbk])
5⃣️每天定点测量,孵育CCK8的时间也都保持一致
6⃣️其实96孔板不太容易污染,可以直接用培养细胞的96孔板进行测定,尽快测定,测完盖上盖子放回即可,但是我们酶标仪距离培养室有一定距离,所以我会把上清吸到新的96孔板中洗一洗晾干下次接着用它测


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