准备做琼脂培养基需要以下步骤：1、将琼脂粉称取25克，加入500毫升的生理盐水中，搅拌均匀。2、将试剂置于85℃的水浴中加热至完全溶解。3、将溶液过0.45微米的滤膜进行过滤并放凉到室温。4、加入适量的生物因子及必要的pH调整剂（如NaOH或HCl），使pH在7.0-7.2之间。5、将琼脂培养基装入无菌条件下制备好的容器中，用无菌铝箔密封后存储在4℃冰箱中。上述步骤是准备琼脂培养基所必须遵循的步骤。在制备过程中应注意一些事情：1、使用无菌条件下制备好的容器装琼脂培养基并密封保存以保证最佳效果。2、在加入生物因子及必要pH 调整剂时注意量不能过大也不能过少；3、在存储时注意不能存储太久或者受到光直射而影响有效性。