做细胞转染你该注意的几点!
细胞转染的注意事项
细胞:
对数生长期
·贴壁生长的细胞，转染前一日，消化细胞、铺板，转染时细胞密度为70~90%左右
·悬浮细胞:转染前4小时换新鲜培养液
DNA表达载体:必须无蛋白质、RNA和其他化学物质污染
血清:开始准备DNA和阳离子脂质体试剂稀释液时要使用无血清培养基，血清的存在会影响复合物的形成。而在转染过程中可以使用血清。
抗生素:会影响转染效率。抗生素一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使抗生素可以进入细胞，降低细胞活性，导致转染效率降低。!!!!对于筛选稳定转染细胞，不要在选择性培养基中使用青霉素和链霉素，原因在于这些抗生素是选择性抗生素的竞争性抑制剂。
影响转染效率的主要因素:
1、细胞培养物
2、血清
3、DNA质量
4、转染技术