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ELISA法 同时检测dsDNA抗体的通知
大医一院检验科
2018-08-22 11:26
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为了提高抗dsDNA抗体的敏感性和特异性，我科利用间接免疫荧光法和ELISA法同时检测抗dsDNA抗体。作为系统性红斑狼疮（SLE）诊断标准之一,抗dsDNA抗体还可以反映SLE的疾病活动度尤其是肾脏受累情况，与狼疮性肾炎（LN）密切相关，且抗体水平的升高可以出现在疾病复发之前。
一、目前检测现状
目前公认的检测方法主要有间接免疫荧光法（IIF）、ELISA法和放射免疫法三种测定方法，其中临床最广泛应用的是IIF法和ELISA，IIF法具有较高的临床特异性，若其他方法检测抗dsDNA抗体阳性与临床表现不符合时，建议采用IIF法进一步确认，对SLE的疾病活动进行检测时，应定期使用同种定量检测方法进行抗dsDNA抗体的检测。
之前我科使用ELISA方法检测抗dsDNA，ELISA的检测敏感度高于IIF，能够定量检测抗体，但有可能检测到低亲和力抗体，或者含有单链DNA（ssDNA）、组蛋白等其他核抗原成分可引起假阳性结果，ELISA方法中使用的人工纯化抗原，其纯度也可直接影响检测结果，因此，该方法特异性不及IIF法。
间接免疫荧光法（IIF）使用绿蝇短膜虫天然DNA检测抗dsDNA抗体，绿蝇短膜虫动基体只含双链DNA而不含其它人细胞核抗原，因此，被认为是非常理想的抗dsDNA抗体的靶抗原。IIF法对SLE的特异性更高，通常作为确诊依据，IIF法是目前广泛使用的用于检测高亲和力和中等亲和力抗dsDNA抗体的方法，但是不能提供抗体准确的定量信息。
二、同时检测的优势
同时应用IIF和ELISA两种方法对抗dsDNA抗体进行检测，可以相互印证，互为补充，避免因检测方法学而出现的假阴性或假阳性结果。对于可能出现两种检测方法结果不符的情况，原因分析如下：
1、IIF（-）而ELISA（+）：被检血清中可能含有低亲和力的抗dsDNA抗体，或含有高滴度的抗ssDNA抗体、抗组蛋白抗体等其他核抗原成分；或dsDNA抗原在纯化包被过程中变性裂解为ssDNA。
2、IIF（+）而ELISA（-）：被检血清中可能含有高亲和力的抗dsDNA抗体。
三、参考资料
以下数据资料摘自中国自身免疫病实验诊断论坛，北京协和医院风湿免疫科实验室胡朝军老师发表的文章“抗ds-DNA抗体临床检测的魔咒，真实世界并没你认为的那么美好！”，部分内容如下： 随机抽取协和医院风湿免疫科实验室某天抗ds-DNA抗体发放的临床报告结果资料进行统计发现IIF-ds-DNA与ELISA-ds-DNA抗体检测结果如下：
综合上面三天的统计结果发现：IIF与ELISA检测dsDNA抗体同时阳性占32.3%～42.9%，单独IIF阳性占11.9%～36.3%，单独ELISA阳性占20.9%～47.6%。
临床检测标本中，只有40%左右的ds-DNA抗体阳性标本能同时被IIF和ELISA检测到，还有60%的ds-DNA抗体阳性标本只能被IIF和ELISA的其中一种方法检测到。可以看出临床上IIF与ELISA检测抗ds-DNA抗体都不完美，都会造成约30%的抗ds-DNA抗体阳性患者漏检。而且IIF-ds-DNA与ELISA-ds-DNA抗体单独阳性也具有非常重要的临床意义。

大夫怎么跟你说，一般来说ANA前期阳性率很高，可以说明有问题，但不能完全确诊就是狼。 DSdna阳性率低一点。但说服力更强。