1目的
为了确保微生物检测质量,需对使用的培养基进行鉴定。保证用原料配制或干粉成品培养基的质量符合质量指标的要求。
2范围
适用于新购进的干粉培养基和实验室用原料配制的固体和液体培养基的性能测试方法。
3职责
3.1培养基验收人员负责用本方法对培养基进行检则验收。
3.2科室负责人负责对培养基进行综合管理。
4器材与检测设备
4.1玻璃器材 12×100灭菌试管,10mL、5mL、1ml灭菌吸管和培养皿250mL三角烧瓶;250 mL灭菌广口瓶,L棒。
4.2灭菌生理盐水
4.3培养基:参考培养基 待检测培养基;
4.4检测仪器 :分光光度计,恒温培养箱,恒温水浴箱;
4.5参考菌种:大肠杆菌ATCC25922、鼠伤寒沙门氏菌50013、福氏志贺氏菌2a ATCC12022、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌ATCC25923、表皮葡萄球菌ATCC12228溶血性链球菌23310、铜绿假单胞菌10211、小肠耶森氏菌ATCC 23715 、单核增生李斯特菌ATCC19111、 枯草芽胞杆菌ATCC6633b 、蜡状芽胞杆菌ATCC11778、
白色念珠菌ATCC10231、酿酒酵母ATCC9763、黑曲霉ATCC16404b
5检测步骤
5.1营养琼脂质量检测试验操作规程
5.1.1工作菌株的制备: 将储备的标准菌株,如大肠杆菌ATCC 25922接种到琼脂斜面或平板,36±1℃,孵育过夜,得到足够的纯培养物。孵育后取3~5个单个菌落悬浮于少量TSB中,孵育4~5h,用分光光度计在625nm波长下调整吸光度值为0.08~0.1,
确保菌落计数达到(1~2)×108CFU/mL。
也可以按下列方法配制目视比浊标准管:称取氯化钡0.244g,溶于100mL纯水中。分别吸取1.1、1.2、1.3、1.5mL ,每管各加1moL硫酸5mL,再加水至25mL,在625nm波长下调整吸光度为0.060、0.080、0.100、0.120 4个不同的浊度。分别装在12×100mm的试管中,每管4-5mL,加橡皮塞并用石蜡封口。用无菌盐水从斜面上洗下菌苔,在同样口径的试管中与标准管比对,加盐水调节至0.08标准浊度管相似。即相当于0.5麦氏单位。
5.1.2培养基的制备
0.5麦氏单位各种细菌的数量
金黄色葡萄球菌 8×108/mL
痢疾志贺氏菌 8×108/mL
大肠埃希氏菌 8×108/mL
福氏志贺氏菌 8×108/mL
铜绿假单胞菌 10×108/mL
宋内氏志贺氏菌 8×108/mL
甲型副伤寒沙门氏菌 10×108/mL
甲型溶血性链球菌 2×108/mL
乙型副伤寒沙门氏菌 10×108/mL
霍乱弧菌 18×108/mL
伤寒沙门氏菌 10×108/mL
EL-Tor O1群霍乱弧菌 18×108/mL
5.1.2培养基的制备
选择能够代表一批培养基的适当数量的平板进行测试,每个平板用大约15mL培养基,使得培养基厚度至少为2mm,并保证平板表面足够干燥。用同样方法制备参考培养基。由于使用了大肠杆菌ATCC 25922作为测试菌株,因此这里选择伊红美兰培养基作为参考培养基。
5.1.3将工作菌株悬液10倍梯度稀释,以10-5,10-6,10-7稀释度涂布于平板。每个稀释度分别均匀涂布2个待测成品营养琼脂平板和2个伊红美兰平板,每个平板的接种量为0.1mL。于36±1℃,培养24h。
5.1.4计算每一平板的菌落数,评价菌落的大小和表面特征。
5.1.5结果解释
根据平板上菌液的体积和稀释倍数,计算出培养基上菌落平均值。
计算生长率PR
NS
PR= ——
NO










