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微生物实验室室内质控小结

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培养基种类繁多,生产培养基的厂家也很多,虽然都有各自的检测标准,但由于原材料的来源不同,产品质量良莠不一。为了寻找合格的培养基供应商,就必须有一个检测标准,对商品进行规范化的检测。为了保证微生物实验室的检测质量,培养基质量至关重要。本室经常使用的培养基有 21种,基本上实现了培养基全面的质量控制。
本室配置了用于检测培基质量的工作菌种10株。基中有:大肠杆菌(ATCC25922)、鼠伤寒沙门氏菌(50013)、福氏志贺氏菌2a型( ATCC12022)、副溶血性弧菌(20553)、金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、乙型溶血性链球菌(23310)、铜绿假单胞菌(10211)、小肠结肠炎耶尔森氏菌(ATCC 23715 )、单核增生李斯特菌(554001)、蜡状芽胞杆菌(ATCC11778)、
培养基质量控制的方法:
1  培养基的理化性状检测:从外观上判定干粉培养基是否有结块受潮等现象,观察配制后的培养基透明程度,及不溶物。pH值有否发生改变。是否有细菌霉菌污染。琼脂的凝固性能是否适合接种分离。
2  普遍营养琼脂的生长试验与生长指数
2.1 所有培养基按照标准方法.和商品培养基瓶签提示方法配制。
2.2 工作菌株的纯培养物先稀释成0.5麦氏单位浓度,然后再以10倍梯度稀释至 10-5、10-6、10-7,各取稀释悬液0.10mL涂布于检测平板和参比平板,每个稀释度分别均匀涂布2个营养琼脂平板和2个作为参比的伊红美兰平板,(伊红美兰平板已事先检测合格).于36±1℃,培养48h并计算每一平板的菌落数,评价菌落的大小和表面特征。按照《培养基质量检测细则》方法计算细菌的生长指数。
3  选择性固体培养基
3.1检测细菌的生长指数:其方法是0.5 麦氏单位的细菌悬液,通过该试验培养基按指定的方法检测,达到1-2×108   CFU/mL以上,  作为判定合格的要求。
3.2选择性指数是1种目标菌混进1-3个容易区分的非目标菌,非目标菌比目标菌多2个对数值,混合后作常规分离,分别统计目标菌落数和同一平板的菌落总数,并计算比值,目标菌与非目标菌的比值要求达到≮0.2或一个菌落数适合检查的平板上有10个以上容易识别的目标菌,并有典型的菌落外观、可判为合格。
3.3采用多个菌液平行划线法来检测培养基的选择能力;制备工作菌液,目标菌的浓度10-6 ,非目标菌10-4。用3mm接种环分别取目标菌液和各种非目标菌培养物放
在培养基的左面一端,接种环贴在培养基的表面向另
一端拉一条较宽的线条。在测试的选择性平板培养基
表面可同时划上多个非目标菌的平行线条, 每一个菌
液划一条宽线条,每线条相距1cm.目标菌在最中央,
非目标菌在目标菌的两边,相互之间不可交叉,记录
各细菌的序号位置。在36±1℃,培养24h±2后观察
结果:目标菌长出一条完整的宽线菌苔,非目标菌应
部分或全部被抑制。根据长出细菌的状况来确认培养基
的选择性能。目标菌必须达到2,非目标菌没有生长,生长指数为0, 属最好;部份长细菌的为1 , 次之;非目标菌长出一条完整的宽线菌苔为2。说明培养基对该菌无选择性。
4液体培养基的控制方法
4.1 生长指数的检测:
用3mm接种环挑取1环相当于0.5麦氏单位的目标菌悬液,在普通营养琼脂平板上按图划16条线条, 经标准指定的温度和时间培养.按4个区域菌落生长情况记分:每条有菌苔生长的划线作1分。有一半的线条或密集菌落生长记0.5分。生长划线不足一半,不记分。第Ⅳ区域2根相交的线条作1条,划线上有密集的菌落记1分,不足20个菌落不记分。记录的分数称生长指数(G)。G值大于6时,培养基可接收。非选择性培养基的G值通常较高。在选择性培养基上,目标菌应呈现典型的菌落,而非目标菌的生长应部分或完全被抑制



1楼2009-10-31 14:02回复