最近我在用病毒载体做knockdown转染， 转染的细胞是HepG2. 首先，我用的是pLKO.1-TRC cloning vector. 然后用六孔板种上HepG2, 用不同的浓度puromycin去筛选细胞，得到致死所有细胞的最小浓度是3mg/ml. 于是开始转染。但是开始出现问题了，1）转然24小时后，细胞貌似比以前长得快多了，然后用puromycin去筛选，六天了死的很少，细胞在六孔板里都长满了，只好分开重新种，又用5mg/ml puromycin 去筛选，还是死的少，不久有长满了。Western Blotting 显示 没怎么敲掉，条带几乎一样粗。