慢乙肝使用现有疗法即使延长治疗周期，临床治愈仍然较为困难。核心蛋白抑制剂(CPIs)代表着一类新型的直接作用抗病毒药物，可靶向病毒生命周期的多个步骤。Assembly Biosciences 公司的研究人员表征了一种最近发现的核心蛋白抑制剂，该核心蛋白抑制剂在阻断 cccDNA 的合成上具有增强的潜力。
研究人员使用诱导的 HepAD38 细胞系（Gt D），感染的 HepG2-NTCP 细胞和原代人肝细胞（PHH）来确定药物的抗病毒活性。使用瞬时转染测定法或HBV稳定细胞系建立泛基因型活性。使用 HepAD38 细胞中的一系列抑制浓度进行联合研究。
使用引物和对HBV核心基因特异的探针，通过Taqman PCR（qPCR）定量HBV DNA。通过 ELISA 定量 HBeAg 和 HBsAg。 如前所述，分别通过 RT-qPCR，Northern 印迹或b-DNA，蛋白印迹，酶免疫测定（EIA）和 Southern 印迹检测 HBV 总 RNA /衣壳化的pgRNA，衣壳和衣壳相关的核心DNA。
研究结果
ABI-H3733 表现出对 HepAD38 细胞和PHH（分别为EC50 5和12 nM）中病毒DNA复制有效抑制，并使得感染的 HepG2-NTCP 细胞和 PHH 中 的HBeAg，HBsAg 和 pgRNA降低（分别为EC50 43和61 nM）。
ABI-H3733 的抗病毒活性是泛基因型的，并且针对一组已知的CPI抗性变体保留了活性。未观察到针对其他病毒（EC50>10μM）或细胞毒性测定（CC50>10μM）的显著活性。
联合研究预测当与Nuc疗法联合用药时对病毒具有协同抑制作用。
ABI-H3733具有良好的物理性质，较低的药物相互作用潜力和多种物种中有利的PK谱。
作用机制研究表明，阻断 pgRNA 的衣壳化和破坏预先形成的衣壳（EC50 133 nM）的效力增强，导致在感染期间将含有rcDNA的衣壳运输到细胞核期间过早解体。 使用Southern 印迹分析，ABI-H3733 抑制 cccDNA 形成，EC50为125nM。
综上，研究人员认为，ABI-H3733 是一种新型核心蛋白抑制剂(CPIs)，衍生自新的化学骨架。它对HBV感染周期中的多个步骤具有有效的抑制活性，特别是与cccDNA形成相关的那些步骤。增强的效力和有利的临床前概况支持将下一代CPI推进到临床开发中。