牛流行热(bovine ephemeral fever,BEF)又称牛暂时热,三日热,僵硬病或流行性感冒.是奶牛,黄牛和水牛的一种病毒性,急性,热性传染病.本病的特征是体温突然升高(40℃以上),呼吸迫促,全身虚弱,伴随消化机能和运动器官的机能障碍.
地理分布和危害
本病从1867年首次在西非报道至今已有一百多年的历史.现在仍广泛流行于非洲,亚洲和澳洲许多国家和地区.中国自40年代在江浙一带就有本病流行的记载.在1976年分离,鉴定牛流行热病毒之前,一直把本病称为牛流行性感冒.由于本病的侵袭,牛群大批发病,奶牛的奶产量和奶质下降,种公牛精液质量受损,耕牛使役能力减退或丧失,部分怀孕母牛流产,有的病牛瘫痪,给养牛业造成巨大损失.
病原
牛流行热病毒为弹状病毒科暂时病毒属(Ephemerovirus)的成员.本病毒可通过220nm的微孔滤膜,但不能通过100nm的滤膜,因此认为病毒的大小在100-220nm之间.将超速离心浓缩和初步提纯的病毒粒子用磷钨酸负染可在电子显微镜观察到典型的弹状病毒.病毒粒子的直径为80nm-170nm,从超薄切片的样品中可观察到的病毒粒子大小为80nm×160nm.病毒感染乳鼠脑的超薄切片和病毒感染BHK21-C13的细胞的超薄切片电镜观察,病毒大小分别为70nm×145nm和88nm×176nm.病毒的分子量为3.5×106道尔顿.将3H标记的病毒以氯化铯等密度梯度离心所获的结果表明,本病毒的浮密度为1.196g/ml.
本病毒的增殖不受DNA合成抑制物5-碘-2脱氧尿嘧啶或色霉素A3所抑制,从而证明它是RNA病毒.进一步的研究表明本病毒为单链RNA病毒.
在56℃下作用10分钟病毒感染价下降103TCID50,作用20-30分钟感染价完全丧失,在37℃下作用12小时降低10TCID50,作用48-72小时以及34℃作用120小时病毒可完全被灭活.把含病毒的血液在-2℃-2℃保存48天,在-15℃保存45天以及冻干含毒血液在-40℃下保存985天仍有致病性.把感染BHK21-WI2病毒细胞培养液置-80℃保存134天未见感染价下降,保存278天下降102TCID50.-20℃保存73天下降102TCID50.在4℃下保存40天感染价未见下降,但130天病毒则完全被灭活.将病毒感染的BHK21细胞培养液置距30W紫外杀菌灯70cm处照射10-30分钟,其感染价急剧下降直至完全被灭活.Tanaka等将病毒细胞培养液置距20W紫外杀菌灯下20cm处照射90秒则可达到完全灭活.以73000×g4℃下超速离心可将大部分病毒沉淀下来.
在20%-50%醚或5%-10%的氯仿于15℃-25℃下作用10-30分钟,病毒可完全被灭活.把病毒感染乳鼠的脑乳剂以0.1%去氧胆酸钠于37℃下作用30分钟或1小时可完全灭活病毒.用0.5%和1%胰蛋白酶处理10分钟病毒能被完全灭活.在pH2.0-3.0以及12.0下作用10分钟病毒可被灭活,在pH7.4-8.0时则无影响.病毒在1mol/L MgCl2存在条件下50℃作用1小时可被灭活.
对牛以外的动物进行感染试验的结果表明,牛流行热病毒不能使马,绵羊,山羊,猪,犬,家兔,豚鼠,小鼠和鸡胚感染发病.牛是本病毒唯一的敏感动物.用本病毒感染牛高热期血液的白细胞层对生后1-3日龄的乳鼠脑内接种后第10天小鼠开始发病,出现后躯麻痹而死亡.死亡乳鼠平均生存日数为12.4天.死亡率为17%.乳鼠脑内继代3代死亡率100%.平均生存日数为5天.继代至8代平均生存日数缩短为2.8天.对生后3日龄以上的乳鼠和体重15g成熟小鼠脑内接种,未见小鼠感染死亡.乳鼠腹腔接种病毒也不增殖.用生后1日龄的乳地鼠和乳大鼠脑内接种分离病毒成功,离乳的地鼠和大白鼠未见发病死亡.
自用乳鼠和乳地鼠分离病毒以来,也被证明牛流行热病毒可在BHK21,Hmlu-l,Vero,HmT(劳氏肉瘤病毒Schmidt-Ruppin株诱变的肿瘤细胞),地鼠肾和BEK(牛胎肾)细胞上增殖并伴有细胞病变(CPE).在地鼠胎儿,大鼠肾,大鼠胎儿,小鼠肾和胎儿,豚鼠肾,鸡肾以及小牛白细胞,肾,睾丸,骨髓,胸腺,甲状腺和副肾等各种培养细胞上均未见病毒增殖和产生CPE.用MS和Vero细胞培养病毒证明不但病毒能增殖伴有CPE,还能形成蚀斑.用BHK21细胞培养病毒孵育的温度34℃或30℃比38℃或25℃出现的CPE要好.在培养液中添加干扰素抑制剂羟皮质(甾)酮(17a-hydrox-ycortlcosterone)可提高BHK21细胞培养病毒的感染价.
地理分布和危害
本病从1867年首次在西非报道至今已有一百多年的历史.现在仍广泛流行于非洲,亚洲和澳洲许多国家和地区.中国自40年代在江浙一带就有本病流行的记载.在1976年分离,鉴定牛流行热病毒之前,一直把本病称为牛流行性感冒.由于本病的侵袭,牛群大批发病,奶牛的奶产量和奶质下降,种公牛精液质量受损,耕牛使役能力减退或丧失,部分怀孕母牛流产,有的病牛瘫痪,给养牛业造成巨大损失.
病原
牛流行热病毒为弹状病毒科暂时病毒属(Ephemerovirus)的成员.本病毒可通过220nm的微孔滤膜,但不能通过100nm的滤膜,因此认为病毒的大小在100-220nm之间.将超速离心浓缩和初步提纯的病毒粒子用磷钨酸负染可在电子显微镜观察到典型的弹状病毒.病毒粒子的直径为80nm-170nm,从超薄切片的样品中可观察到的病毒粒子大小为80nm×160nm.病毒感染乳鼠脑的超薄切片和病毒感染BHK21-C13的细胞的超薄切片电镜观察,病毒大小分别为70nm×145nm和88nm×176nm.病毒的分子量为3.5×106道尔顿.将3H标记的病毒以氯化铯等密度梯度离心所获的结果表明,本病毒的浮密度为1.196g/ml.
本病毒的增殖不受DNA合成抑制物5-碘-2脱氧尿嘧啶或色霉素A3所抑制,从而证明它是RNA病毒.进一步的研究表明本病毒为单链RNA病毒.
在56℃下作用10分钟病毒感染价下降103TCID50,作用20-30分钟感染价完全丧失,在37℃下作用12小时降低10TCID50,作用48-72小时以及34℃作用120小时病毒可完全被灭活.把含病毒的血液在-2℃-2℃保存48天,在-15℃保存45天以及冻干含毒血液在-40℃下保存985天仍有致病性.把感染BHK21-WI2病毒细胞培养液置-80℃保存134天未见感染价下降,保存278天下降102TCID50.-20℃保存73天下降102TCID50.在4℃下保存40天感染价未见下降,但130天病毒则完全被灭活.将病毒感染的BHK21细胞培养液置距30W紫外杀菌灯70cm处照射10-30分钟,其感染价急剧下降直至完全被灭活.Tanaka等将病毒细胞培养液置距20W紫外杀菌灯下20cm处照射90秒则可达到完全灭活.以73000×g4℃下超速离心可将大部分病毒沉淀下来.
在20%-50%醚或5%-10%的氯仿于15℃-25℃下作用10-30分钟,病毒可完全被灭活.把病毒感染乳鼠的脑乳剂以0.1%去氧胆酸钠于37℃下作用30分钟或1小时可完全灭活病毒.用0.5%和1%胰蛋白酶处理10分钟病毒能被完全灭活.在pH2.0-3.0以及12.0下作用10分钟病毒可被灭活,在pH7.4-8.0时则无影响.病毒在1mol/L MgCl2存在条件下50℃作用1小时可被灭活.
对牛以外的动物进行感染试验的结果表明,牛流行热病毒不能使马,绵羊,山羊,猪,犬,家兔,豚鼠,小鼠和鸡胚感染发病.牛是本病毒唯一的敏感动物.用本病毒感染牛高热期血液的白细胞层对生后1-3日龄的乳鼠脑内接种后第10天小鼠开始发病,出现后躯麻痹而死亡.死亡乳鼠平均生存日数为12.4天.死亡率为17%.乳鼠脑内继代3代死亡率100%.平均生存日数为5天.继代至8代平均生存日数缩短为2.8天.对生后3日龄以上的乳鼠和体重15g成熟小鼠脑内接种,未见小鼠感染死亡.乳鼠腹腔接种病毒也不增殖.用生后1日龄的乳地鼠和乳大鼠脑内接种分离病毒成功,离乳的地鼠和大白鼠未见发病死亡.
自用乳鼠和乳地鼠分离病毒以来,也被证明牛流行热病毒可在BHK21,Hmlu-l,Vero,HmT(劳氏肉瘤病毒Schmidt-Ruppin株诱变的肿瘤细胞),地鼠肾和BEK(牛胎肾)细胞上增殖并伴有细胞病变(CPE).在地鼠胎儿,大鼠肾,大鼠胎儿,小鼠肾和胎儿,豚鼠肾,鸡肾以及小牛白细胞,肾,睾丸,骨髓,胸腺,甲状腺和副肾等各种培养细胞上均未见病毒增殖和产生CPE.用MS和Vero细胞培养病毒证明不但病毒能增殖伴有CPE,还能形成蚀斑.用BHK21细胞培养病毒孵育的温度34℃或30℃比38℃或25℃出现的CPE要好.在培养液中添加干扰素抑制剂羟皮质(甾)酮(17a-hydrox-ycortlcosterone)可提高BHK21细胞培养病毒的感染价.
