某一弹的时候说到,转入AD或者BD的酵母是通过营养缺陷的培养基来筛选的,好吧,我先来介绍一下酵母培养基的基本情况。
完全培养基:YPDA,酵母提取物 + 葡萄糖 + 腺嘌呤 + Agar
选择培养基:SD/缺,碳源是 葡萄糖, 氮源是 无氨基酸酵母氮源(说白了就是不含氨基酸的氮源), DO(dropout,16?种氨基酸的混合物),X-α-gal(报告基因所用,会变蓝绿色),Agar, 色氨酸/亮氨酸/组氨酸/腺嘌呤(四种营养缺陷筛选所用的)
我们用的酵母双杂交的菌种是AH109(MATa)或者Y187(MATα),它自身不能合成色氨酸/亮氨酸/组氨酸/腺嘌呤,而
AD的质粒pGADT7上含有合成亮氨酸的基因
BD的质粒pGBKT7上含有合成色氨酸的基因
AD、BD能够激活的报告基因除了LacZ(β半乳糖苷酶,能使X-gal变蓝),还有
组氨酸的合成基因
腺嘌呤的合成基因
MEL1,α-半乳糖苷酶,能使X-α-gal变蓝
(clonetechY2H操作手册)
培养基中缺失腺嘌呤的酵母AH109,会长成红色克隆,被认为是衰老的酵母,不适宜用于实验。
那么问题就来了:
1、猜想,神秘的Agar在这里是什么作用?
2、是设计营养缺陷的培养基,让它上面只能生长:转入了AD的酵母;转入了BD的酵母;同时转入了AD和BD的酵母;同时转入了AD和BD并且融合蛋白发生相互作用的酵母
3、一般我们将AD、BD两种质粒同时转入酵母,那么根据AH109和Y187的配子型,如何有效地提高这种共转的效率?
4、**试设计制作酵母彩虹的方案(含有红色到蓝色酵母克隆)
完全培养基:YPDA,酵母提取物 + 葡萄糖 + 腺嘌呤 + Agar
选择培养基:SD/缺,碳源是 葡萄糖, 氮源是 无氨基酸酵母氮源(说白了就是不含氨基酸的氮源), DO(dropout,16?种氨基酸的混合物),X-α-gal(报告基因所用,会变蓝绿色),Agar, 色氨酸/亮氨酸/组氨酸/腺嘌呤(四种营养缺陷筛选所用的)
我们用的酵母双杂交的菌种是AH109(MATa)或者Y187(MATα),它自身不能合成色氨酸/亮氨酸/组氨酸/腺嘌呤,而
AD的质粒pGADT7上含有合成亮氨酸的基因
BD的质粒pGBKT7上含有合成色氨酸的基因
AD、BD能够激活的报告基因除了LacZ(β半乳糖苷酶,能使X-gal变蓝),还有
组氨酸的合成基因
腺嘌呤的合成基因
MEL1,α-半乳糖苷酶,能使X-α-gal变蓝
(clonetechY2H操作手册)
培养基中缺失腺嘌呤的酵母AH109,会长成红色克隆,被认为是衰老的酵母,不适宜用于实验。
那么问题就来了:
1、猜想,神秘的Agar在这里是什么作用?
2、是设计营养缺陷的培养基,让它上面只能生长:转入了AD的酵母;转入了BD的酵母;同时转入了AD和BD的酵母;同时转入了AD和BD并且融合蛋白发生相互作用的酵母
3、一般我们将AD、BD两种质粒同时转入酵母,那么根据AH109和Y187的配子型,如何有效地提高这种共转的效率?
4、**试设计制作酵母彩虹的方案(含有红色到蓝色酵母克隆)











