一次模板，是之前师兄已经构建好的质粒（含我要得目的片段），可以P出好几条带；我胶回收单一条带后，酶切又变成两条。一条我要得大小（1700左右），一条500左右。之后连接转化就做不成功了。
另两次次模板是原植物（水稻）逆转录的结果，RNA很好，RT应该也没有问题。但一次P不出，一次P出来1400bp多的
请问如果实验结果变数这么大，是不是引物特异性不够呢？