AASLD2025：在研乙肝新药ALG-000184单药治疗慢乙肝96周数据公布
ALG-000184 是一款由 Aligos Therapeutics 开发用于慢性乙型肝炎治疗的泛基因型 II 型衣壳组装调节剂（CAM-E），是ALG-001075 的前药，在体外研究结果显示可抑制病毒复制（第一作用模式（MOA））和cccDNA的建立/补充（第二作用模式（MOA））。
来自研究 ALG-000184 201（NCT04536337）的数据表明，300 mg ALG-000184 单药治疗 ≤ 96 周具有良好的安全性和强效的抗病毒作用。在2025年美国肝病学会年会（AASLD2025）上，研究人员呈现完整的 96 周单药治疗数据。
在研究第 4 部分 B 队列中，HBeAg 阳性和 HBeAg 阴性受试者接受了为期 96 周的开放标签 300 mg ALG-000184 单药治疗，随后进行 8 周的核苷（酸）类似物（NA）单药治疗。
共纳入 10 例 HBeAg 阳性和 11 例 HBeAg 阴性受试者。HBeAg 阳性和 HBeAg 阴性受试者的基线 HBV 标志物平均水平分别为：HBV DNA 8.0 和 4.3 log10 IU/mL，HBV RNA 5.3 和 2.0 log10 拷贝/mL，HBsAg 4.3 和 3.5 log10 IU/mL，HBcrAg 8.3 和 3.1 log10 U/mL。HBeAg 阳性受试者的基线 HBeAg 平均水平为 2.6 log10 PEI U/mL。
在单药治疗期间，观察到对 HBV DNA 的显著且持续的抗病毒抑制作用。在第 48 周，60%（6/10）HBeAg 阳性受试者的 HBV DNA 水平降至低检出限（LLOQ, 10 IU/mL, 目标检测 [TD]）以下，但无受试者达到 < LLOQ（目标未检测 [TND], < 4.29 IU/mL）。第 96 周时，这一比例增加至 100%（10/10）< LLOQ [TD 或 TND]，50%（5/10）< LLOQ [TND]。HBV DNA 的平均基线下降幅度分别为第 48 周 6.9 log10 IU/mL 和第 96 周 7.0 log10 IU/mL。

所有 11 例 HBeAg 阴性受试者在第 20 周时 HBV DNA 达到 < LLOQ [TD 或 TND]，第 96 周有 89%（8/9）受试者达到 < LLOQ [TND]。此外，所有 HBeAg 阴性受试者在第 6 周，HBeAg 阳性在第 52 周达到 HBV RNA < LLOQ（10 拷贝/mL）。
根据 HBV DNA 水平评估，未出现病毒突破。此外，HBeAg 阳性受试者观察到 HBV 抗原的多数量级下降，HBeAg 阴性受试者 HBcrAg 水平显著下降。
治疗耐受性良好，无严重不良事件（AEs）报告，也无因治疗引发的不良事件（TEAEs）而停药。3 级 TEAEs 包括无症状 ALT 升高（HBeAg 阳性：n=3；HBeAg 阴性：n=1）以及胆固醇/甘油三酯升高（n=1），均在继续用药期间恢复。所有伴随 ALT 升高的 3 级 TEAEs 均表现出 HBV DNA 显著下降，同时合成/排泄性肝功能无临床显著变化。
300 mg ALG-000184 单药治疗 96 周可在 TN/CNT 慢性 HBV 感染受试者中持续、显著抑制 HBV DNA，且无病毒突破。这些发现支持继续开发 ALG-000184作为潜在改进的单药抑制方案。ALG-000184 与替诺福韦单药治疗的直接比较已在 Phase 2 B-SUPREME 研究中启动。
ALG-000184 ± 恩替卡韦（ETV）在≤96周治疗期间及随访8周的HBV抗原数据
ALG-000184-201（NCT04536337）是一项在健康志愿者及慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染的TN/CNT受试者中进行的多中心一期临床试验。既往数据显示，ALG-000184 ± 恩替卡韦（ETV）在≤96周内具有良好的安全性和强效的抗病毒作用。研究人员报告了治疗期间及随访8周的HBV抗原数据。
TN或CNT HBeAg阳性受试者接受100 mg ALG-000184 ± ETV 治疗≤24周，或300 mg ALG-000184 ± ETV治疗≤96周。完成ALG-000184治疗后，受试者进入8周随访期，仅给予核苷（酸）类似物（NA）。
100 mg ALG-000184 ± ETV（≤24周，N=8）和300 mg ALG-000184 ± ETV（≤96周，N=21）组基线平均水平相当，HBsAg 分别为4.7 vs. 4.4 log10 IU/mL；HBeAg为2.6 vs. 2.5 log10 PEI U/mL；HBcrAg为8.5 vs. 8.3 log10 U/mL。
第24周时观察到剂量依赖性的HBV抗原下降，100 mg ALG-000184 ± ETV（n=4）和300 mg ALG-000184 ± ETV（n=19）的HBsAg、HBeAg和HBcrAg平均下降分别为0.5 vs 0.6 log10 IU/mL、0.2 vs 0.6 log10 PEI U/mL和0.6 vs 1.2 log10 U/mL。

在16位接受300 mg ALG-000184 ± ETV治疗96周的受试者中，HBsAg、HBeAg和HBcrAg水平持续平均下降（第96周分别为0.9 log10 IU/mL、1.5 log10 PEI U/mL、2.2 log10 U/mL）。值得注意的是，这16位受试者在8周随访期间HBV抗原变化较小，第8周随访的平均下降分别为HBsAg 0.8 log10 IU/mL、HBeAg 1.2 log10 PEI U/mL、HBcrAg 1.9 log10 U/mL。
研究显示，100或300 mg ALG-000184 ± ETV治疗≤24周或≤96周可在TN/CNT HBeAg阳性受试者中引起剂量和治疗持续时间依赖的多对数HBV抗原下降。此外，在较长期及较高剂量（300 mg ALG-000184）治疗后的随访8周内，HBV抗原仍保持下降趋势。这提示cccDNA可能的消耗，与CAM-E的次级作用机制相关。
ALG-001075对 HBeAg 作用研究
ALG-000184是一种新型衣壳组装调节剂（CAM-E）ALG-001075的前药，可导致空衣壳的形成。ALG-000184在慢乙肝患者中显示出对HBV DNA、RNA、HBsAg、HBcrAg和HBeAg的最佳类降幅。ALG-000184在HBeAg阳性患者治疗的前两周即可引起0.4 log10 PEI U/mL的即时下降，提示ALG-001075可能对HBeAg具有直接作用。
利用在Huh7细胞中的短暂HBeAg表达和在HepG2细胞中的稳定转染（载体为野生型或T33N突变HBeAg），研究ALG-001075及其他CAM对HBeAg生物合成的影响。通过化学发光免疫分析（CLIA）测定EC50值评估对HBeAg分泌的影响，同时通过Western印迹分析研究ALG-001075对HBeAg及其前体的作用。进一步利用生物物理光谱移位分析研究CAMs与纯化荧光标记的HBeAg之间的相互作用。
研究显示，ALG-001075及其他CAM在没有其他HBV蛋白的情况下显著降低了HBeAg的分泌水平，提示对HBeAg具有直接作用。HBeAg抑制的EC50值远高于HBV DNA抑制，但T33N突变的HBeAg引入后显著升高，表明其结合位点类似于HBV核心蛋白。Western印迹分析显示，CAMs还影响HBeAg前体（p22），从而抑制HBeAg分泌。最后，通过光谱移位的生物物理分析确认，ALG-001075及其他CAM可直接与野生型HBeAg结合，但不与HBeAg T33N突变体结合。
ALG-001075显示出对HBeAg的直接结合能力，并在体外显著降低分泌HBeAg水平，这与其前药ALG-000184的临床观察一致，提示ALG-001075通过直接抑制HBeAg作为第三种作用机制。尽管直接作用于HBeAg需要比CAMs的主要和次要作用更高的化合物浓度，但通过前药ALG-000184实现的高药代动力学暴露以及母体ALG-001075的相对HBeAg靶向效力可能使这一效应在临床上可观察到。
ALG-001075在体外对HBV cccDNA形成及HBV DNA整合的影响
在HBV感染的HepG2-NTCP细胞中，通过Southern印迹法和数字PCR（dPCR）定量HBV cccDNA。使用Southern印迹法及PNA夹式qPCR，研究HBV表达的HepG2.117细胞中可引起HBV DNA整合的双链线性DNA（dslDNA）及松弛环状DNA（rcDNA）的产生。通过基因组DNA分离、HBV序列富集、下一代测序及随后的HBV-宿主连接识别，定量HBV感染HepG2-NTCP细胞后HBV DNA整合水平。
结果显示，当ALG-001075与病毒接种液同时加入时，通过其次级作用机制，在剂量依赖性下显著降低cccDNA形成，这一点通过Southern印迹、dPCR及抗原定量得到确认。对核苷（酸）类似物恩替卡韦和替诺福韦则未观察到类似效果。ALG-001075还通过其主要作用机制，有效且剂量依赖性地抑制rcDNA和dslDNA的产生，从而降低可用于HBV DNA整合的前体库。对HBV感染细胞在相对较短时间（14天）内的HBV DNA整合进行直接定量显示，宿主-病毒连接数明显减少，ALG-001075的降低效果优于核苷（酸）类似物。
ALG-001075表现出对HBV cccDNA形成和HBV DNA整合的强效预防作用，进一步确认其最佳同类特性及优于常用核苷（酸）类似物的优势。
评估衣壳解聚及CAM化合物的靶标残留时间
ALG-000184已显示在慢性乙型肝炎患者中对HBV DNA、RNA、HBsAg、HBeAg及HBcrAg的降低效果处于同类最佳。然而，缺乏定量且可预测的生化测定方法对新型高效CAM-E化合物的表征。研究人员设计了一种新型跳跃稀释测定法（jump dilution assay），以评估衣壳解聚及CAM化合物的靶标残留时间。
在HepG2.117和HepAD38细胞中使用细胞内HBV DNA作为指标评估细胞抗病毒活性。通过细胞核心免疫染色（点示）测定、猝灭测定、负染电镜及热转移测定来测量和分类衣壳组装。通过跳跃稀释测定法评估化合物的衣壳解聚及残留时间。在AAV-HBV转导的C57Bl/6小鼠中研究化合物药代动力学。
研究结果，确定了一部分CAM能够在变性条件下引发HBV核心蛋白（Cp）寡聚化，从而提出假设：CAMs可能对衣壳组装具有异质性稳定作用。设计了一种新型跳跃稀释测定法，以测量CAM对预组装衣壳内在稳定性的时间依赖性影响。尽管效力较低的第一代CAM未明显阻碍衣壳解聚，但最有效的化合物（包括ALG-000184的前体ALG-001075）可使衣壳稳定性延长至4天。研究发现，通过跳跃稀释测定法测得的靶标残留时间与基于细胞的CAM-E抗病毒效力相关。在AAV-HBV小鼠中，肝脏中高表达HBV Cp的情况下，具有长残留时间的CAM显示出优异的肝脏暴露。
研究人员开发了一种新型跳跃稀释测定法，以评估CAM化合物的生化效力及靶标残留时间。结果显示，Cp寡聚稳定性和靶标残留时间是表征新一代CAM的重要参数。
ALG-000184 是一款由 Aligos Therapeutics 开发用于慢性乙型肝炎治疗的泛基因型 II 型衣壳组装调节剂（CAM-E），是ALG-001075 的前药，在体外研究结果显示可抑制病毒复制（第一作用模式（MOA））和cccDNA的建立/补充（第二作用模式（MOA））。
来自研究 ALG-000184 201（NCT04536337）的数据表明，300 mg ALG-000184 单药治疗 ≤ 96 周具有良好的安全性和强效的抗病毒作用。在2025年美国肝病学会年会（AASLD2025）上，研究人员呈现完整的 96 周单药治疗数据。
在研究第 4 部分 B 队列中，HBeAg 阳性和 HBeAg 阴性受试者接受了为期 96 周的开放标签 300 mg ALG-000184 单药治疗，随后进行 8 周的核苷（酸）类似物（NA）单药治疗。
共纳入 10 例 HBeAg 阳性和 11 例 HBeAg 阴性受试者。HBeAg 阳性和 HBeAg 阴性受试者的基线 HBV 标志物平均水平分别为：HBV DNA 8.0 和 4.3 log10 IU/mL，HBV RNA 5.3 和 2.0 log10 拷贝/mL，HBsAg 4.3 和 3.5 log10 IU/mL，HBcrAg 8.3 和 3.1 log10 U/mL。HBeAg 阳性受试者的基线 HBeAg 平均水平为 2.6 log10 PEI U/mL。
在单药治疗期间，观察到对 HBV DNA 的显著且持续的抗病毒抑制作用。在第 48 周，60%（6/10）HBeAg 阳性受试者的 HBV DNA 水平降至低检出限（LLOQ, 10 IU/mL, 目标检测 [TD]）以下，但无受试者达到 < LLOQ（目标未检测 [TND], < 4.29 IU/mL）。第 96 周时，这一比例增加至 100%（10/10）< LLOQ [TD 或 TND]，50%（5/10）< LLOQ [TND]。HBV DNA 的平均基线下降幅度分别为第 48 周 6.9 log10 IU/mL 和第 96 周 7.0 log10 IU/mL。

所有 11 例 HBeAg 阴性受试者在第 20 周时 HBV DNA 达到 < LLOQ [TD 或 TND]，第 96 周有 89%（8/9）受试者达到 < LLOQ [TND]。此外，所有 HBeAg 阴性受试者在第 6 周，HBeAg 阳性在第 52 周达到 HBV RNA < LLOQ（10 拷贝/mL）。
根据 HBV DNA 水平评估，未出现病毒突破。此外，HBeAg 阳性受试者观察到 HBV 抗原的多数量级下降，HBeAg 阴性受试者 HBcrAg 水平显著下降。
治疗耐受性良好，无严重不良事件（AEs）报告，也无因治疗引发的不良事件（TEAEs）而停药。3 级 TEAEs 包括无症状 ALT 升高（HBeAg 阳性：n=3；HBeAg 阴性：n=1）以及胆固醇/甘油三酯升高（n=1），均在继续用药期间恢复。所有伴随 ALT 升高的 3 级 TEAEs 均表现出 HBV DNA 显著下降，同时合成/排泄性肝功能无临床显著变化。
300 mg ALG-000184 单药治疗 96 周可在 TN/CNT 慢性 HBV 感染受试者中持续、显著抑制 HBV DNA，且无病毒突破。这些发现支持继续开发 ALG-000184作为潜在改进的单药抑制方案。ALG-000184 与替诺福韦单药治疗的直接比较已在 Phase 2 B-SUPREME 研究中启动。
ALG-000184 ± 恩替卡韦（ETV）在≤96周治疗期间及随访8周的HBV抗原数据
ALG-000184-201（NCT04536337）是一项在健康志愿者及慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染的TN/CNT受试者中进行的多中心一期临床试验。既往数据显示，ALG-000184 ± 恩替卡韦（ETV）在≤96周内具有良好的安全性和强效的抗病毒作用。研究人员报告了治疗期间及随访8周的HBV抗原数据。
TN或CNT HBeAg阳性受试者接受100 mg ALG-000184 ± ETV 治疗≤24周，或300 mg ALG-000184 ± ETV治疗≤96周。完成ALG-000184治疗后，受试者进入8周随访期，仅给予核苷（酸）类似物（NA）。
100 mg ALG-000184 ± ETV（≤24周，N=8）和300 mg ALG-000184 ± ETV（≤96周，N=21）组基线平均水平相当，HBsAg 分别为4.7 vs. 4.4 log10 IU/mL；HBeAg为2.6 vs. 2.5 log10 PEI U/mL；HBcrAg为8.5 vs. 8.3 log10 U/mL。
第24周时观察到剂量依赖性的HBV抗原下降，100 mg ALG-000184 ± ETV（n=4）和300 mg ALG-000184 ± ETV（n=19）的HBsAg、HBeAg和HBcrAg平均下降分别为0.5 vs 0.6 log10 IU/mL、0.2 vs 0.6 log10 PEI U/mL和0.6 vs 1.2 log10 U/mL。

在16位接受300 mg ALG-000184 ± ETV治疗96周的受试者中，HBsAg、HBeAg和HBcrAg水平持续平均下降（第96周分别为0.9 log10 IU/mL、1.5 log10 PEI U/mL、2.2 log10 U/mL）。值得注意的是，这16位受试者在8周随访期间HBV抗原变化较小，第8周随访的平均下降分别为HBsAg 0.8 log10 IU/mL、HBeAg 1.2 log10 PEI U/mL、HBcrAg 1.9 log10 U/mL。
研究显示，100或300 mg ALG-000184 ± ETV治疗≤24周或≤96周可在TN/CNT HBeAg阳性受试者中引起剂量和治疗持续时间依赖的多对数HBV抗原下降。此外，在较长期及较高剂量（300 mg ALG-000184）治疗后的随访8周内，HBV抗原仍保持下降趋势。这提示cccDNA可能的消耗，与CAM-E的次级作用机制相关。
ALG-001075对 HBeAg 作用研究
ALG-000184是一种新型衣壳组装调节剂（CAM-E）ALG-001075的前药，可导致空衣壳的形成。ALG-000184在慢乙肝患者中显示出对HBV DNA、RNA、HBsAg、HBcrAg和HBeAg的最佳类降幅。ALG-000184在HBeAg阳性患者治疗的前两周即可引起0.4 log10 PEI U/mL的即时下降，提示ALG-001075可能对HBeAg具有直接作用。
利用在Huh7细胞中的短暂HBeAg表达和在HepG2细胞中的稳定转染（载体为野生型或T33N突变HBeAg），研究ALG-001075及其他CAM对HBeAg生物合成的影响。通过化学发光免疫分析（CLIA）测定EC50值评估对HBeAg分泌的影响，同时通过Western印迹分析研究ALG-001075对HBeAg及其前体的作用。进一步利用生物物理光谱移位分析研究CAMs与纯化荧光标记的HBeAg之间的相互作用。
研究显示，ALG-001075及其他CAM在没有其他HBV蛋白的情况下显著降低了HBeAg的分泌水平，提示对HBeAg具有直接作用。HBeAg抑制的EC50值远高于HBV DNA抑制，但T33N突变的HBeAg引入后显著升高，表明其结合位点类似于HBV核心蛋白。Western印迹分析显示，CAMs还影响HBeAg前体（p22），从而抑制HBeAg分泌。最后，通过光谱移位的生物物理分析确认，ALG-001075及其他CAM可直接与野生型HBeAg结合，但不与HBeAg T33N突变体结合。
ALG-001075显示出对HBeAg的直接结合能力，并在体外显著降低分泌HBeAg水平，这与其前药ALG-000184的临床观察一致，提示ALG-001075通过直接抑制HBeAg作为第三种作用机制。尽管直接作用于HBeAg需要比CAMs的主要和次要作用更高的化合物浓度，但通过前药ALG-000184实现的高药代动力学暴露以及母体ALG-001075的相对HBeAg靶向效力可能使这一效应在临床上可观察到。
ALG-001075在体外对HBV cccDNA形成及HBV DNA整合的影响
在HBV感染的HepG2-NTCP细胞中，通过Southern印迹法和数字PCR（dPCR）定量HBV cccDNA。使用Southern印迹法及PNA夹式qPCR，研究HBV表达的HepG2.117细胞中可引起HBV DNA整合的双链线性DNA（dslDNA）及松弛环状DNA（rcDNA）的产生。通过基因组DNA分离、HBV序列富集、下一代测序及随后的HBV-宿主连接识别，定量HBV感染HepG2-NTCP细胞后HBV DNA整合水平。
结果显示，当ALG-001075与病毒接种液同时加入时，通过其次级作用机制，在剂量依赖性下显著降低cccDNA形成，这一点通过Southern印迹、dPCR及抗原定量得到确认。对核苷（酸）类似物恩替卡韦和替诺福韦则未观察到类似效果。ALG-001075还通过其主要作用机制，有效且剂量依赖性地抑制rcDNA和dslDNA的产生，从而降低可用于HBV DNA整合的前体库。对HBV感染细胞在相对较短时间（14天）内的HBV DNA整合进行直接定量显示，宿主-病毒连接数明显减少，ALG-001075的降低效果优于核苷（酸）类似物。
ALG-001075表现出对HBV cccDNA形成和HBV DNA整合的强效预防作用，进一步确认其最佳同类特性及优于常用核苷（酸）类似物的优势。
评估衣壳解聚及CAM化合物的靶标残留时间
ALG-000184已显示在慢性乙型肝炎患者中对HBV DNA、RNA、HBsAg、HBeAg及HBcrAg的降低效果处于同类最佳。然而，缺乏定量且可预测的生化测定方法对新型高效CAM-E化合物的表征。研究人员设计了一种新型跳跃稀释测定法（jump dilution assay），以评估衣壳解聚及CAM化合物的靶标残留时间。
在HepG2.117和HepAD38细胞中使用细胞内HBV DNA作为指标评估细胞抗病毒活性。通过细胞核心免疫染色（点示）测定、猝灭测定、负染电镜及热转移测定来测量和分类衣壳组装。通过跳跃稀释测定法评估化合物的衣壳解聚及残留时间。在AAV-HBV转导的C57Bl/6小鼠中研究化合物药代动力学。
研究结果，确定了一部分CAM能够在变性条件下引发HBV核心蛋白（Cp）寡聚化，从而提出假设：CAMs可能对衣壳组装具有异质性稳定作用。设计了一种新型跳跃稀释测定法，以测量CAM对预组装衣壳内在稳定性的时间依赖性影响。尽管效力较低的第一代CAM未明显阻碍衣壳解聚，但最有效的化合物（包括ALG-000184的前体ALG-001075）可使衣壳稳定性延长至4天。研究发现，通过跳跃稀释测定法测得的靶标残留时间与基于细胞的CAM-E抗病毒效力相关。在AAV-HBV小鼠中，肝脏中高表达HBV Cp的情况下，具有长残留时间的CAM显示出优异的肝脏暴露。
研究人员开发了一种新型跳跃稀释测定法，以评估CAM化合物的生化效力及靶标残留时间。结果显示，Cp寡聚稳定性和靶标残留时间是表征新一代CAM的重要参数。
