一、术语题(每小题3分，共30分):
01凝聚
02絮凝
03细胞破碎率
04空穴效应
05酶溶法(固液分离章节技术)
06包含体
07蛋白质复性
08错流过滤
09差速离心法
10道地药材
二、单选题(每小题1分):
21下列方法中，【】通常用于大规模处理植物细胞的细胞破碎
A 研磨法B高压匀浆法C超声破碎法
D珠磨法
22 包含体变性溶解过程中打开错配的二硫键可选用【】 A 二硫苏糖醇
BB-巯基乙醇C半胱氨酸
D以上皆不可23下列预处理方法中，【】不是微生物发酵液的预处理方法A加热B絮凝C离心三、简述题(每小题10分):
31蛋白质表达是重要蛋白质功能研究和应用的重要步骤，表达过程中会遇到多种多样问题，例如可溶性差、表达量低、没有催化活性等。其中，在利用底盘细胞进行异源蛋白质表达或过表达过程中，经常遇到的表达产量高，但不分泌到细胞外或不具有生物学活性的现象。
D调pH
(1)请解释这一生物学现象是什么；(3分) (2)请简要分析形成这一现象的原因；(3分)
(3)该现象在表达具有重要活性功能蛋白质的过程中的优势和劣势。(4分
一、术语题（每小题3分，共30分）
01. 凝聚：胶体粒子在电解质或pH变化作用下失去稳定性而聚集形成较小聚集体的过程，常用于加速沉降。
02. 絮凝：通过添加絮凝剂（如聚合物）使胶体粒子桥联形成较大絮状物的过程，便于沉降或过滤，区别于凝聚的长程作用。
03. 细胞破碎率：破碎后释放的胞内产物量与理论最大胞内产物量的比值，计算公式：$$ \text{破碎率} = \frac{\text{释放的胞内产物量}}{\text{总胞内产物量}} \times 100\% $$
04. 空穴效应：在超声破碎中，液体中微小气泡快速形成和坍塌产生高压冲击波的现象，导致细胞结构破坏。
05. 酶溶法：一种固液分离技术，利用酶（如溶菌酶）特异性降解细胞壁或膜以温和释放胞内物质。
06. 包含体：异源蛋白表达中形成的不可溶性蛋白聚集体，主要由错误折叠蛋白质组成，需变性溶解和复性恢复活性。
07. 蛋白质复性：变性溶解后的包含体蛋白在去除变性剂和优化条件下重新折叠成正确三维结构并恢复生物活性的过程。
08. 错流过滤：膜分离技术，料液平行于膜表面流动，部分透过膜，未透过的料液循环回系统以减少膜污染，适用于高固含量体系。
09. 差速离心法：利用不同颗粒沉降速度差异，通过逐步增加离心力分离混合物组分（如细胞器、细胞碎片）。
10. 道地药材：在特定地域、气候和栽培条件下生长，具有优质性和稳定药效的中药材，强调地理标志性。
二、单选题（每小题1分）
21. D 珠磨法（珠磨法适用于大规模植物细胞破碎，因其能高效处理坚韧细胞壁）
22. A 二硫苏糖醇（二硫苏糖醇是还原剂，常用于打开错配二硫键；B-巯基乙醇也可用，但二硫苏糖醇更标准）
23. C 离心（离心是分离操作，不是预处理方法；预处理包括加热、絮凝、调pH等）
三、简述题（每小题10分）
31. (1) 解释现象（3分）：
这一现象是包含体形成（Inclusion Body Formation）。在利用底盘细胞（如大肠杆菌）进行异源蛋白质表达或过表达时，蛋白质以高产量积累，但形成不溶性、无活性的聚集体（包含体），不分泌到细胞外且缺乏生物学活性。
(2) 原因分析（3分）：
- 折叠环境不匹配：宿主细胞缺乏异源蛋白所需的分子伴侣或翻译后修饰机制（如二硫键形成酶），导致错误折叠。
- 高表达速率：快速蛋白质合成超过折叠能力，疏水区域暴露，促进聚集。
- 细胞内环境：氧化还原状态、pH或离子强度不适合正确折叠，尤其对含二硫键的蛋白质。
(3) 优势和劣势（4分）：
- 优势：
- 包含体易于分离纯化（通过离心），减少蛋白酶降解风险。
- 高表达量提供大量原料蛋白，简化初始下游处理。
- 适用于表达毒性蛋白，因无活性形式降低对宿主细胞的损伤。
- 劣势：
- 蛋白质无活性，需额外复性步骤（如稀释或色谱法），复性效率低（通常<50%），增加成本和时间。
- 复性过程易导致再聚集或错误折叠，活性回收率不稳定。
- 不适合表达分泌性或膜蛋白，因包含体在胞内积累。
01凝聚
02絮凝
03细胞破碎率
04空穴效应
05酶溶法(固液分离章节技术)
06包含体
07蛋白质复性
08错流过滤
09差速离心法
10道地药材
二、单选题(每小题1分):
21下列方法中，【】通常用于大规模处理植物细胞的细胞破碎
A 研磨法B高压匀浆法C超声破碎法
D珠磨法
22 包含体变性溶解过程中打开错配的二硫键可选用【】 A 二硫苏糖醇
BB-巯基乙醇C半胱氨酸
D以上皆不可23下列预处理方法中，【】不是微生物发酵液的预处理方法A加热B絮凝C离心三、简述题(每小题10分):
31蛋白质表达是重要蛋白质功能研究和应用的重要步骤，表达过程中会遇到多种多样问题，例如可溶性差、表达量低、没有催化活性等。其中，在利用底盘细胞进行异源蛋白质表达或过表达过程中，经常遇到的表达产量高，但不分泌到细胞外或不具有生物学活性的现象。
D调pH
(1)请解释这一生物学现象是什么；(3分) (2)请简要分析形成这一现象的原因；(3分)
(3)该现象在表达具有重要活性功能蛋白质的过程中的优势和劣势。(4分
一、术语题（每小题3分，共30分）
01. 凝聚：胶体粒子在电解质或pH变化作用下失去稳定性而聚集形成较小聚集体的过程，常用于加速沉降。
02. 絮凝：通过添加絮凝剂（如聚合物）使胶体粒子桥联形成较大絮状物的过程，便于沉降或过滤，区别于凝聚的长程作用。
03. 细胞破碎率：破碎后释放的胞内产物量与理论最大胞内产物量的比值，计算公式：$$ \text{破碎率} = \frac{\text{释放的胞内产物量}}{\text{总胞内产物量}} \times 100\% $$
04. 空穴效应：在超声破碎中，液体中微小气泡快速形成和坍塌产生高压冲击波的现象，导致细胞结构破坏。
05. 酶溶法：一种固液分离技术，利用酶（如溶菌酶）特异性降解细胞壁或膜以温和释放胞内物质。
06. 包含体：异源蛋白表达中形成的不可溶性蛋白聚集体，主要由错误折叠蛋白质组成，需变性溶解和复性恢复活性。
07. 蛋白质复性：变性溶解后的包含体蛋白在去除变性剂和优化条件下重新折叠成正确三维结构并恢复生物活性的过程。
08. 错流过滤：膜分离技术，料液平行于膜表面流动，部分透过膜，未透过的料液循环回系统以减少膜污染，适用于高固含量体系。
09. 差速离心法：利用不同颗粒沉降速度差异，通过逐步增加离心力分离混合物组分（如细胞器、细胞碎片）。
10. 道地药材：在特定地域、气候和栽培条件下生长，具有优质性和稳定药效的中药材，强调地理标志性。
二、单选题（每小题1分）
21. D 珠磨法（珠磨法适用于大规模植物细胞破碎，因其能高效处理坚韧细胞壁）
22. A 二硫苏糖醇（二硫苏糖醇是还原剂，常用于打开错配二硫键；B-巯基乙醇也可用，但二硫苏糖醇更标准）
23. C 离心（离心是分离操作，不是预处理方法；预处理包括加热、絮凝、调pH等）
三、简述题（每小题10分）
31. (1) 解释现象（3分）：
这一现象是包含体形成（Inclusion Body Formation）。在利用底盘细胞（如大肠杆菌）进行异源蛋白质表达或过表达时，蛋白质以高产量积累，但形成不溶性、无活性的聚集体（包含体），不分泌到细胞外且缺乏生物学活性。
(2) 原因分析（3分）：
- 折叠环境不匹配：宿主细胞缺乏异源蛋白所需的分子伴侣或翻译后修饰机制（如二硫键形成酶），导致错误折叠。
- 高表达速率：快速蛋白质合成超过折叠能力，疏水区域暴露，促进聚集。
- 细胞内环境：氧化还原状态、pH或离子强度不适合正确折叠，尤其对含二硫键的蛋白质。
(3) 优势和劣势（4分）：
- 优势：
- 包含体易于分离纯化（通过离心），减少蛋白酶降解风险。
- 高表达量提供大量原料蛋白，简化初始下游处理。
- 适用于表达毒性蛋白，因无活性形式降低对宿主细胞的损伤。
- 劣势：
- 蛋白质无活性，需额外复性步骤（如稀释或色谱法），复性效率低（通常<50%），增加成本和时间。
- 复性过程易导致再聚集或错误折叠，活性回收率不稳定。
- 不适合表达分泌性或膜蛋白，因包含体在胞内积累。
